Indiana Jones nhận được cuốn nhật ký và một tấm bản đồ bí ẩn từ cha anh. Đây là manh mối dẫn tới chiếc Chén thánh, vốn chỉ lưu truyền trong truyền thuyết. Cùng lúc đó, anh nhận được tin cha mình đã mất tích. Vị giáo sư tới Ý, lần theo tấm bản đồ và cuốn nhật ký kia, để tìm cha. Dù tìm được giáo sư Henry Jones, Indiana lại phải tiếp tục hành trình phiêu lưu. Quân Phát xít đang tới gần chiếc Chén thánh, nếu đoạt được nó, ước mơ trở thành nòi giống bá chủ thế giới của chúng sẽ hoàn thành.